反甲状腺剤の過酸化酵素のElisaテスト キット反TPOの抗体テスト キット

Anti-Thyroidの過酸化酵素のElisaの反TPOキット

1. 意図されていた使用

人間の血清の甲状腺剤の過酸化酵素への抗体の生体外の量的な決定のための免疫学的検定。反‐ TPOの決定は自己免疫の甲状腺疾患の診断で援助として使用される。

2. 概要

• 甲状腺剤の‐の特定の過酸化酵素（TPO）はthyrocytesの微粒体にあり、頂点の細胞の表面に表現される。thyroglobulin （Tg）との共同作用ではこの酵素にL ‐のチロシンおよびdi生じるモノラル‐および‐のiodotyrosineの化学カップリングのiodinationで必要な機能が甲状腺ホルモンT4、T3および立方フィートを形作るある。
• TPOは潜在的なautoantigenである。TPOへの抗体の上げられた血清の力価は自己免疫によって引き起こされる甲状腺炎の複数の形態にある。酒造機は頻繁に言葉「microsomal抗体」がTPOが微粒体によってもたらされた自己免疫の抗原としてまだ識別されていない時間から起きることを見つけた。臨床感覚で2つの言葉の反‐ TPOおよびmicrosomal抗体は同義的に使用することができる;しかしテスト方法に関して相違がある。
• 高い反‐ TPOの力価は慢性の橋本の甲状腺炎の患者の90%までにある。グレーブス病では、患者の70%に高い力価がある。プロシージャの感受性が同時に他の甲状腺剤の抗体（反‐ Tg、TSHの‐の受容器の‐の抗体- TRAb）を定めることによって高めることができるが否定的な見つけることは自己免疫疾患の可能性を除外しない。抗体の力価の大きさは病気の臨床活動に関連しない。最初に高い力価は病気のまたは赦免の間の長い期間後に否定的になることができる。抗体が続く赦免再現すれば、再発はありそうである。
• 通常のmicrosomal抗体テストが抗原の準備としてunpurified微粒体を用いる一方、反‐ TPOテストは浄化された過酸化酵素を使用する。2つのプロシージャは臨床感受性の点では対等な性能であるが、‐のロットの一貫性およびより高い臨床特定性へのよりよいロットの‐はテストする原因でから良質がの抗原使用した反‐ TPO期待することができる。酵素はimmunosorbentの試金を使用する抗原およびウサギの反人間のIgGの人間の抗体をつないだ（反IgG）。

3. テスト主義

間接方法、試金の総持続期間:70分。

反TPO ELISAは固相、ツー ステップの孵化のプロシージャのTPOへの抗体の検出のための間接ELISA方法を用いる。非常にimmunoreactive人間TPOの抗原が塗られるポリスチレンのmicrowellのストリップは前である。最初の孵化のステップの間に、反TPO特定の抗体は、もしあれば、固相にプリコートしたTPOの抗原を区切られる。井戸は自由な血清蛋白質を取除くために洗浄されウサギの酵素の西洋わさびの過酸化酵素（HRP-の共役）に活用される反人間のIgGの抗体は（反IgG）加えられる。第2孵化のステップの間に、これらのHRP活用された抗体はあらゆる抗原抗体（IgG）の複合体に前に形作った区切られ、自由なHRP共役は洗浄によってそれから取除かれる。Tetramethylbenzidine （TMB）および尿素の過酸化物を含んでいる色原体の解決は井戸に加えられ、抗原抗体反IgG （HRP） immunocomplexの存在で、無色の色原体は青色のプロダクトへの縛られたHRPの共役によって加水分解される。青い色は硫酸と反作用を停止した後黄色い回る。

色の強度の量は測定することができ、井戸で捕獲される抗体の量とそれぞれサンプルの抗体の量に比例している。

4. 試薬材料は提供した

•塗られたMicroplateの8つのx12ストリップ、96の井戸。人間TPOの抗原とプリコートされる。

•口径測定器、使用可能な6つのガラスびん、1つのmLそれぞれ;集中:0 （A）、25 （B）、50 （C）、100 （D）、250 （E）および500 （F） IU/mL。

•酵素の共役、1つのガラスびんは、HRP （西洋わさびの過酸化酵素）の11.0 mLウサギをBSA （牛のようなアルブミン）を含んでいるTris NaCl緩衝のIgGの反人間の抗体と（反IgG）分類した。0.1% ProClin300防腐剤を含んでいる。

•血清の希釈剤:1つのガラスびん、11mL。緩衝塩および染料を含んでいること

•洗浄解決の濃縮物、1つのガラスびん、25のml （40X集中した）、PBSプレティーンの洗浄解決は。

•基質、1つのガラスびん、使用可能な11ml （tetramethylbenzidine） TMB。

•解決、1つのガラスびん、硫酸1つのmol/lのの6.0 mlを停止しなさい。

•IFUの1枚のコピー。

•版のふた:2部分。

必要なが、材料（提供されなくて）

•450nmおよび620nm波長の吸収性の機能のMicroplateの読者。

•Microplateの洗濯機。

•定温器。

•版のシェーカー。

•精密の50µlをの渡すMicropipettesおよび多重チャンネルのmicropipettesよくより1.5%。

•吸収性のペーパー。

•蒸留水

5. 試験手順

•井戸の必要な数だけ使用し、試金されるべき各口径測定器およびサンプルのためのmicroplateの井戸を書式作成しなさい。

•各井戸に口径測定器の100 µLを加えなさい。

•口径測定器井戸を除く各井戸にサンプル希釈剤（緑色）の100 µLを加えなさい。

•各サンプル希釈剤の井戸（ノートにサンプルの10 µLを加えなさい:Wellsの試薬は緑からの青い色を）回したり、そして30秒を揺する。

•版を版のふたで覆い、30分の37 °Cで孵化させなさい。

•デカンテーションか抱負によってマイクロ版の内容を放棄しなさい。デカントしていたら、吸収性のペーパーとの版乾燥したの叩き、しみを付けなさい。

•洗浄解決の350 µLを加えなさい、（蛇口およびしみ）デカントしなさいまたは吸い出しなさい。合計5洗浄のための4つの付加的な回を繰り返しなさい。洗浄の終わりに、版を逆にし、吸収性のペーパーに残りの洗浄解決を叩きなさい。

•酵素の共役の100 µLを加えなさい、

•版を版のふたで覆い、30分の37 °Cで孵化させなさい。

•洗浄解決の350 µLを加えなさい、（蛇口およびしみ）デカントしなさいまたは吸い出しなさい。合計5洗浄のための4つの付加的な回を繰り返しなさい。洗浄の終わりに、版を逆にし、吸収性のペーパーに残りの洗浄解決を叩きなさい。

•各井戸に基質の100 µLを加えなさい。10分の反作用のための暗闇の周囲温度（18-25℃）で覆い、孵化させなさい。小国家の付加の後で版を揺すってはいけない。

•各井戸に停止解決の50 µLを加えなさい。

•井戸内の液体を混合するために15-20秒の間揺すりなさい。保障することは重要ことを完全に黄色になる青い色の変更である。

•マイクロ版の読者の450 nmで各井戸の吸光度を（620への健康な欠陥を最小にする参照の波長として630 nmを使用して）読みなさい。結果は加えることの30分以内に停止する解決を読まれるべきである。